应用案例(便携式4通道SPR仪-P4SPR):通过P4SPR快速测量人IgG和抗IgG结合的亲和力

应用案例(便携式4通道SPR仪-P4SPR):通过P4SPR测量人IgG和抗IgG结合的亲和力

 Rapid evaluation of Human IgG and Anti-IgG binding affinity using P4SPR

翻译整理:北京佰司特贸易有限责任公司

介绍

免疫球蛋白G (IgG)是免疫系统的重要贡献者,它的作用在医学、工程等领域得到了广泛的研究。IgG与抗IgG单克隆抗体之间的特异性相互作用已通过各种技术进行了研究。抗原-抗体相互作用的结合亲和力的确定在生物治疗的发展等各种研究领域中往往是至关重要的。 
P4SPR是一个强大的工具,能够提供标签免费评估各种不同的分子/生物分子的相互作用。在本研究中,我们利用我们的4通道P4SPR实时表征了高亲和力的抗原-抗体相互作用,即IgG和抗IgG。通过实时数据监测和参考信道背景校正,可以快速、方便地获得高质量的结果。

Affinité的P4SPR

Affinité的P4SPR设备的简单、低成本且易于操作等特点降低了SPR应用的障碍。

紧凑的P4SPR,其外形尺寸与一个A4书本相当,可以在实验室工作台上很容易地设置,并在几分钟的培训中由任何人 (从本科生到宇航员,高级化学家到周末科学家)操作。P4SPR 的坚固设计提供了从几分钟到几个小时的独特的灵活测定时间,以适应广泛的生物分子相互作用动力学。

Affinité的P4SPR具有独特的方法来鉴别小型治疗药物的结合配体,并确定结合亲和力和结合动力学。蛋白质固定的简单性和仪器的易用性使这种方法在培训的几分钟内对任何人(本科生到宇航员,高级化学家到周末科学家)都会有一个直观的了解。

 

Hand_device.jpg

 

Materials*
*See Appendix for more details  
- P4SPR
- Au + AffiCoat sensor (Affinité Instruments proprietary peptide-coated sensor) 
- Running buffer (PBS , 0.1% BSA, 0.005% Tween, pH 7.4)
- EDC:NHS solution (400mM : 100mM in H2O)
- Acetate solution (10mM in H2O, pH 4.5)
- Ethanolamine solution (1M in H2O, pH 8.5)
- Glycine solution (10mM in H2O, pH 2.2)
- Goat anti-human IgG (20 µg/mL in acetate solution)

 

Procedure 
1. 用超纯水冲洗传感器芯片,让信号稳定2分钟。
2. 用两个注射器分别注射300毫克的EDC/NHS,持续2分钟。
3.在两个注射口分别注射300升醋酸盐溶液10秒。
4. 注射300硝西洛抗igg,固定20分钟。
5. 用300-400的醋酸盐溶液漂洗。
6. 用500毫升乙醇胺溶液阻塞表面10分钟。
7. 用运行缓冲液钝化表面,让信号稳定15-20分钟。 
8. 在参比注射口注射控制300mll,在样品注射口注射IgG 1pM 300mll,注射约15分钟。
9. 增加IgG浓度(Set A),每次注射15分钟。
10. 用甘氨酸溶液再生,用运行缓冲液钝化表面。
11. 重复步骤8和9,从集合B中注入浓度。
12. 保存从每个IgG浓度的变化,并绘制与IgG浓度的对比图,以评估结合亲和力。

 

Figure 1. 使用P4SPR实时检测不同浓度IgG (set B)与固定在AffiCoat表面的抗IgG的结合。

SPR响应是3个采样通道的平均信号减去参考通道的信号。

Results and Discussion
在本实验中,将抗IgG固定在表面,并将其与浓度不断增加的IgG结合,以评估其结合亲和力。在参考通道中,注入0.1% BSA的对照溶液。从参考信道获得的信号被减去以消除非特定交互作用造成的背景信号。将浓度逐渐增加的IgG溶液注入样品注射口。对三个样本通道的SPR偏移量进行平均、背景校正和分离,极大地节省了分析后的处理时间。
抗igg被固定在AffiCoat传感器芯片上,证明了其减少非特异性相互作用的功能。图1显示了抗IgG与升高的IgG浓度结合的感觉图。对Set B进行了表面再生,取得了良好的表面再生效果。注意,即使是人工注射,连续注射是可重复的。这扩展了系统在提供传感器表面的稳定性和精度以及稳定性方面的能力。
图2显示了浓度依赖性的结合曲线。在引用通道中发生了最小的绑定。采用1:1结合的拟合算法进行叠加。这种相互作用的KD被确定为3.07 nM,这与其他报到的抗IgG和IgG的研究一致。

 

Figure 2. IgG-Anti-IgG binding curve. 

The P4SPR advantage
      Affinite instruments公司的P4SPR是一种模块化、无标签的多通道系统,具有很大的应用通用性。它的可及性和易用性允许快速高质量的SPR结果在抗体表征。它的多通道特性提高了结果的精度,此外,与AffiCoat涂层的传感器芯片,非特异性的相互作用大大减少。这对于研究原始样本中的相互作用尤其有趣。
      P4SPR广泛应用于更复杂的系统,对研究多种抗原-抗体相互作用具有相当大的潜力,并可扩展到其他生物分子相互作用。

 

About Affinité Instruments
      Affinité instruments公司于2015年,是从蒙特利尔大学Université de Montréal分出来而成立的,在SPR领域积累了超过十年的研究成果。有希望的创新的商业化是由在商业、科学和工程方面经验丰富的多样化领导领导的。. 

 

Appendix
PBS: Phosphate Buffer Saline
BSA: Bovine Serum Albumin 
EDC: N-(3-Dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide hydrochloride
NHS: N-hydroxysuccinimide

 

北京佰司特贸易有限责任公司 (https://www.best-sciences.com):
类器官培养仪-HUMIMIC;灌流式细胞代谢分析仪-IMOLA;便携式4通道SPR仪-P4SPR;蓝光/绿光LED凝胶成像;Nanocellect细胞分选仪-WOLF;微纳加工点印仪-NLP2000/DPN5000;

其他新闻动态

创建时间:2021-02-05 11:00