应用案例:质量光度计测量生物分子间相互作用

应用案例(质量光度计-MP):质量光度计测量生物分子间相互作用

Mass Photometry on Biomolecular interactions  

翻译整理:北京佰司特科技有限责任公司     

质量光度计定量了溶液中生物分子的质量分布。生物分子间的相互作用在每个生物过程中都起着关键的作用。质量光度法是在低浓度下定量相互作用的理想选择,其主要优点是它可以检测溶液中存在的生物复合物。分子质量是一个最常用的数据,可以反应出生物分子和生物分子复合物的多种性质,包括同质性,结构完整性和活性的。这意味着质量光度计不仅可以用于简单的纯度测定,还可以用于活性和结合的评估,提供的多种数据,与其他技术验证结果也保持一致。

Antigen-antibody

抗原-抗体相互作用是可以使用质量光度计研究分子系统的一个主要例子,质量光度计可用于确定单价和多价相互作用的结合亲和性。 图1说明了质量光度法如何被用来量化分子间的相互作用。通过单独或混合测量trastuzumab曲妥珠单抗及其靶抗原Her2的质量,可以量化单个抗体分子与靶抗原之间的相互作用。

 

图1:说明了质量光度计如何被用来量化分子间的相互作用。

 

图2:说明了质量光度计可以用来表征DNA-蛋白质复合物。

 

DNA-protein

质量光度计可以用来表征DNA-蛋白质复合物,这在基因表达、复制和DNA修复中至关重要。 ​ 在这个例子中,质量光度计不仅可以检测DNA结合,还可以提供蛋白质的低聚态在DNA结合时如何变化的信息(图2)。

在这里,我们提出了一种基于质量光度计的分析方法,可以了解穗状糖蛋白的寡聚态、与ACE2的相互作用以及直接与ACE2作用的受体结合域(RBD)的构象状态的一些关键方面。这些rbd可以是“向上”构象,可以与ACE2相互作用,也可以是“向下”构象,不可能相互作用(图1)。我们可以证明重组产生SARS-CoV-2飙升ectodomain形式定义良好的三聚物(图2)。在挑战ACE2,可以识别不同的人口相对应绑定一个或多个副本ACE2每三聚物(图2)这表明混合人口rbd的向上或向下的构象,以及ACE2与刺突蛋白内可接近的rbd的功能结合。

 

Related publications

Measuring the affinity of protein-protein interactions on a single-molecule level by mass photometry.

Wu et al., Analytical Biochemistry 2020, 592, 113575 ​

In this work, the authors show how mass photometry can be used to study multivalent complexes and quantify the affinities of different binding sites in a single measurement.

 

Casposase structure and the mechanistic link between DNA transposition and spacer acquisition by CRISPR-Cas

Hickman et al., eLife 2020, 9:e50004 ​

Mass photometry was used to characterise the oligomeric state of casposase alone and in a complex with different DNA constructs.

 

 

北京佰司特科技有限责任公司 (https://www.best-sciences.com):

类器官串联芯片培养仪-HUMIMIC;灌流式细胞组织类器官代谢分析仪-IMOLA;光片显微镜-LSM-200;

蛋白质稳定性分析仪-PSA-16;单分子质量光度计-TwoMP;超高速视频级原子力显微镜-HS-AFM;

全自动半导体式细胞计数仪-SOL COUNT;农药残留定量检测仪—BST-100;台式原子力显微镜-ACST-AFM;微纳加工点印仪-NLP2000/DPN5000;

 

其他新闻动态

创建时间:2021-11-29 14:36